HRP和AP是酶，二抗上连接了酶，要有相应的底物才能显色，可以用化学发光免疫检测底物 ，显色方式可以通过发荧光也可以不发荧光(例如给予ECL底物，其中的H2O2和鲁米诺在HRP的作用下，能在黑暗中发出荧光;也可以给予双氧水和DAB，反应产生棕色不溶于水的物质)。根据酶系来选择底物，可以分为HRP和AP底物系统。HRP分子量小，稳定，便宜，反应快速，而AP分子量大，酶促反应慢。

　　FITC为异硫氰酸荧光素，本身就是黄绿色荧光，二抗结合后可直接在荧光显微镜下观察;

　　生物素一般也是挂在二抗上的，利用卵白素分别连接生物素标记的第二抗体和生物标记的酶，由酶催化底物，生成终产物，这个终产物也是不溶于水的。